Skip to content

Komórki mielomonocytowe hematopoetyczne są głównym źródłem partnerów fuzji hepatocytów ad

3 miesiące ago

691 words

Czternaście miesięcy po transplantacji próbki wątroby badano przez barwienie X-gal. Wykryliśmy komórki dawcy wykazujące charakterystyczną morfologię podobną do hepatocytów o częstotliwościach na 300 000 i na 150 000 dla myszy nieleczonych i leczonych DDC (Figura 1A). Komórki hepatocytopodobne dawcy znaleziono głównie jako wyizolowane komórki, a w kilku przypadkach w grupie traktowanej DDC, jako skupiska dwóch i, w jednym przypadku, trzech komórek (dane nie pokazane). Ryc. 1. Różnicowanie wątrobowe po transplantacji pojedynczego HSC. Czternaście miesięcy po przeszczepieniu pojedynczego (3-gal (+ HSC) losowe sekcje wątroby analizowano przez barwienie X-gal. (A) Komórki z morfologią hepatocytów (duże komórki z obfitą cytoplazmą), które wyraźnie wyrażały (3-gal i zostały włączone do miąższu wątroby, wykryto w pierwotnych pojedynczych komórkach biorcy. Mikrografy zostały wykonane przy powiększeniu. 20, z wkładką przy. 100. Hormonalne komórki krwiotwórcze BM zebrano od pierwotnych biorców i przeszczepiono myszom Fah_ / _. (B) Pięć miesięcy po transplantacji, pełne mocowanie X-gal na płatach wątroby ujawniło rozległą niebieską sferoidalną repopulację (groty strzałek). (C) Analiza immunohistochemiczna FAH (ciemnobrązowe zabarwienie) pokazana na sekcji wątroby potwierdza powszechne ponowne zasiedlenie oligoklonalne w całym miąższu gospodarza (groty strzałek). (D) Zwiększone powiększenie reopulowanego guzka ujawnia typową morfologię hepatocytów w brązowych komórkach FAH +. (E) Zamrożone seryjne skrawki barwione kolokacją barwienia X-gal i anty-FAH pokazują, że ekspresja FAH pochodzi z oryginalnego HSC Rosa26 (lacZ +). W celu bardziej rygorystycznej oceny potencjału wątrobowego HSC, komórki BM pochodzące z pojedynczego HSC wyizolowano za pomocą cytometrii przepływowej na podstawie ich ekspresji allelu CD45.2 i przeszczepiono do letalnie napromienionych biorców, którzy wykazywali niedobór ekspresji hydrolazy fumaryloacetooctanowej. (FAH), niezbędny enzym wątrobowy (19). Fah. /. myszy można utrzymywać na 2- (2-nitro-4-trifluorometylobenzol) -1,3-cykloheksanodionie (NTBC), a uprzednio wykazano transplantację całych komórek BM (WBM) w celu uratowania tego niedoboru (10, 20). . W przypadku braku NTBC normalne hepatocyty mają wybitnie selektywną przewagę wzrostu i mogą ponownie zaludnić zmutowaną wątrobę. Aby zmaksymalizować przeżycie myszy biorących BM, terapia NTBC została okresowo przywrócona i wycofana. Po sprawdzeniu wszczepienia krwiotwórczego, 4. 7 miesięcy po transplantacji, Fah. /. biorcy przeszczepów byli uśmiercani, a ich wątroby analizowane histologicznie. Pełne osadzenie barwienia X-gal płatów wątroby dla komórek a-gal + pierwotnie pochodzących z pojedynczego HSC ujawniło rozległą reopulację wątroby zawierającą około 40. 60% miąższu wątroby (Figura 1B). Wszczepienie wątroby, zgodnie z wcześniejszymi doniesieniami (10, 20), wykazało oligoklonalny charakter, z około 200. 400. -Gal + guzki ponownego zaludnienia na mysią wątrobę, podobne do rozpowszechnienia klastrów repopulacji obserwowanych po transplantacji WBM. Analiza histochemiczna wątroby myszy po przeszczepie ujawniła obszerne obszary komórek z morfologią hepatocytów eksprymujących zarówno specyficzny dla hepatocytów enzym FAH, jak i (3-gal (Figura 1, C = E). Ponadto pobrano biochemiczne pomiary czynności wątroby. Myszy z przeszczepionymi mutantami wykazały poziomy prawie wszystkich typów dzikich typów analizowanych (Tabela 1). Wyniki te silnie wskazują, że komórki pochodzące z pojedynczego HSC mogą wytwarzać, oprócz komórek krwiotwórczych, w pełni funkcjonalne hepatocyty i korygować chorobę metaboliczną. Tabela Parametry funkcjonalne pojedynczych hepatocytów HSC Chociaż te wyniki wskazują, że komórki pochodzące z pojedynczego HSC mogą produkować funkcjonalne hepatocyty, nie było jasne, czy sam HSC lub jego zróżnicowane hematopoetyczne potomstwo uległo fuzji z hepatocytami gospodarza. Aby sprawdzić, czy dojrzałe komórki krwiotwórcze linii limfatycznej mogą działać jako partnerzy fuzyjni dla hepatocytów, przeszczepiliśmy 1. 106 komórek WBM od myszy z niedoborem zarówno genu 2 aktywującego rekombinazę (Rag-2), jak i wspólnego receptora cytokiny. łańcuch (. c) w Fah. /. zastępy niebieskie. Brak zarówno Rag-2, jak i myszy u myszy powoduje całkowity brak krążących komórek B, T i NK, ale normalne liczby komórek mieloidalnych i erytroidalnych (21). Cztery tygodnie po transplantacji BM, rozpoczęto pobieranie NTBC w celu wybrania hepatocytów FAH +. Przeszczepione myszy były w stanie przeżyć bez obecności NTBC i były utrzymywane bez leku przez ponad 5 miesięcy. Barwienie immunohistochemiczne wycinków wątroby z tych myszy ujawniło typowe guzki FAH + w miąższu wątroby (dane nie pokazane)
[podobne: lks strażak pielgrzymowice, aparat ortodontyczny nfz, pozycja na rowerze szosowym ]
[podobne: strażak pielgrzymowice, lks strażak pielgrzymowice, wisła strumień ]