Skip to content

Komórki mielomonocytowe hematopoetyczne są głównym źródłem partnerów fuzji hepatocytów cd

2 tygodnie ago

768 words

Kinetyka ponownego zasiedlenia i liczba guzków FAH + na sekcję (tabela 2) u tych myszy nie różniła się od tych u myszy z przeszczepioną prawidłową BM. Dane te sugerują, że komórki linii limfocytarnej nie są wymagane jako partnerzy fuzji hepatocytów. Tabela 2 Udział różnych linii krwiotwórczych w hepatocytach w modelu FAH Następnie chcieliśmy ocenić udział wątroby w dojrzałych komórkach hematopoetycznych linii mieloidalnej. W celu śledzenia komórek mieloidalnych in vivo wykorzystano rekombinację Cre / lox, w której rekombinaza Cre, specyficznie wyrażana w komórkach szpikowych pod endogennymi sekwencjami regulatorowymi genu lizozymu-M (LysM) (22), nieodwracalnie odblokowuje ekspresję. gal reporter (R26R) (23), w ten sposób znakując wszystkie komórki mieloidalne i ich dalsze potomstwo. Locus LysM u myszy jest wyłącznie aktywny w komórkach hematopoetycznych linii mielomonocytowej, ulegających ekspresji umiarkowanie w zatwierdzonych szpikowych przodkach i silnie eksprymowanych w dojrzałych makrofagach i neutrofilach. Przeszczepiliśmy 1. 106 komórek BM od myszy, które były transgeniczne zarówno dla genu LysM-Cre, jak i genu R26R (LysM-Cre / R26R), i które także niosły allel CD45.2, do letalnie napromieniowanego CD45.1 Fah. /. odbiorców. Stopień chimeryzmu hematopoetycznego pochodzącego od dawcy w tych gospodarzach wynosił średnio 85%. 2,9% we krwi obwodowej. W celu zweryfikowania swoistości mieloidalnej ekspresji LysM-Cre, komórki krwi dawcy CD45.2 analizowano pod względem ekspresji p-galu. Podczas gdy tylko 2. 8% krążących komórek B (B220 +) i 1. 6% komórek T (CD3 +) eksprymowało. -Gal, ponad 70% granulocytów (Gr-1high) i 80% monocytów (Mac-1high) komórkami były y-gal (Figura 2A). Ryc. 2 Regeneracja hepatocytów pochodzących od myszy z rodziny Monoeloidów u gospodarzy Fah _ / _. (A) Analiza cytofluorymetryczna krwi obwodowej ze zmutowanych myszy FAH przeszczepionych BM LysM-Cre / R26R. Pokazane profile przepływu były uprzednio bramkowane na komórkach CD45.2 + w celu ograniczenia analizy do komórek pochodzących od dawcy. B220 zastosowano jako przeciwciało komórek B, CD8 jako przeciwciało komórek T, a Gr-1 i Mac-1 jako przeciwciała komórek szpikowych. (B) Histochemiczne wykrywanie aktywności .galowej w wątrobach i kontrolach biorców Fah _ / _. Rosa26 i wątróbki typu dzikiego pobierano od nieprzeszczepionych myszy o odpowiednim genotypie. W przypadku myszy po przeszczepie, genotyp poprzedzający strzałkę reprezentuje genotyp dawcy WBM. Genotyp gospodarza jest wskazany za strzałką. (C i D) immunohistochemia FAH na skrawkach wątroby biorców LysM-Cre / R26R (C) i LysM-Cre (D) WBM, wskazując na pochodzące z donodu brodawki hepatocytów. Skalowane pręty: 200 .m. Sześć miesięcy po transplantacji, wszystkie Fah. /. myszy biorców były niezależne od NTBC; w ten sposób zostały uśmiercone i poddane analizie pod kątem wkładu wątrobowego od dawców poprzez wybarwienie płatów wątroby przez X-gal w całości z góry. Jako pozytywna kontrola, barwienie wątrób Fah. /. myszy przeszczepione WBM od powszechnie eksprymowanego reportera a-galu (myszy Rosa26, odnośnik 24) ujawniły rozległe wszczepienie z typową morfologią guzkową (Figura 2B). W tych biorcach Rosa26 WBM oszacowaliśmy średnią liczbę. -Gal + guzków na wątrobę na 279. 38 (Tabela 2). Analiza wątroby biorców LysM-Cre / R26R WBM wykazała również rozległą reopulację wątroby z klastrami pochodzącymi z (3-galu + mieloidu (Figura 2B). Liczba niebieskich guzków wynosiła 247. 45 (n = 4), podobnie jak wartości kontrolne. Dalsze potwierdzenie charakteru wątrobowego guzków populacyjnych ustalono za pomocą immunohistochemii FAH (Figura 2C). Ostatnio donoszono, że promotor LysM zastosowany w naszych doświadczeniach może być również aktywny w niewielkiej liczbie pluripotencjalnych HSC (25). W ten sposób możliwe byłoby, że HSC nadal były bezpośrednio odpowiedzialne za wytwarzanie hepatocytów. W naszym badaniu tylko 3. 8% komórek Lin. Sca-1 + cKit + SP z myszy LysM-Cre / R26R było dodatnich pod względem aktywności. -Gal (dane nie przedstawione). Gdyby HSC były wyłącznie odpowiedzialne za całą hepatogenną aktywność BM, wówczas oczekiwalibyśmy, że 3. 8% liczby guzów pochodzących z szpiku będzie lacZ + w naszym eksperymencie śledzenia linii. Oczywiście tak nie było; uzyskano taką samą liczbę lacZ + guzów, czy przeszczepione BM pochodzi od LysM-Cre / R26R lub konstytutywnych myszy Rosa26. Ponadto, u biorców BM LysM-Cre / R26R, wyodrębnianie odcinków wątroby dla FAH i lacZ ujawniło, że większość guzków jest pozytywna dla obu markerów (dane nie przedstawione), co pokazuje, że wszystkie hepatocyty pochodzą od progenitorów wykazujących ekspresję LysM. . Tak więc, chociaż nasze eksperymenty nie wykluczają bezpośrednio, że kilka HSC może przyczyniać się do regeneracji hepatocytów, bezpośrednio wykazują one, że zdecydowana większość tego wkładu pochodzi z pośredniej komórki mieloidalnej. Zaprojektowaliśmy dodatkowy eksperyment potwierdzający mieloidalne pochodzenie guzków repopulacyjnych
[podobne: zajęcia sportowe dla dzieci, odklejenie siatkówki oka, pozycja na rowerze szosowym ]
[hasła pokrewne: lks pielgrzymowice, lks beskid brenna, przedszkole strumień ]