Skip to content

Lentivector, w którym pośredniczy SMN w mysim modelu zaniku mięśni kręgosłupa cd

3 miesiące ago

394 words

Każdy mięsień otrzymał pojedyncze zastrzyki do wielu miejsc. Celowo wybraliśmy te miejsca wstrzyknięcia, ponieważ te mięśnie są kluczowe dla mobilności (tylna kończyna), oddychania (przepony i mięśni międzyżebrowych) i karmienia (twarz, język), a tym samym razem określają ogólny stan zdrowia i przeżycie myszy. Wszystkim 5 zwierzętom z SMA wstrzyknięto lentiwektor z ekspresją SMN i 5 z wektorem eksprymującym LacZ. W badaniu uwzględniono pięć nieleczonych zwierząt. Analiza ich masy ciała wykazała znaczną utratę wagi myszy SMA, którym wstrzyknięto LacZ, rozpoczynając między 4 a 5 dniem życia (Figura 3A). Wprowadzenie konstruktu SMN opóźniało utratę masy o 2-3 dni w porównaniu ze zwierzętami, którym wstrzyknięto LacZ (Figura 3A). Zachowanie zwierząt podążało za profilem wagi leczonych zwierząt, wykazując opóźnioną prezentację fenotypową i nieco później tracąc zdolność do ambulatoryjnego leczenia. Ryc. 3. Dostarczanie przez SMR z użyciem Lentivector na początku choroby przedłuża przeżycie i opóźnia fenotyp u myszy SMA. (A) pomiary masy zwierząt leczonych lentivector-SMN lub lentivector-LacZ. (B) Analiza przeżycia u myszy SMA wstrzykniętych w wieku 2 dni za pomocą lentivector-LacZ lub lentivector-SMN. Śmiertelność była znacznie opóźniona u myszy leczonych Lentivector-SMN w porównaniu z grupą kontrolną LacZ. (C) Obraz przedstawiający ekspresjonowaną przez lentiwektora ekspresję SMN w rdzeniu MN w końcowym stadium choroby, monitorowaną za pomocą Abs wobec znacznika HA. Strzałka wskazuje klejnoty. (D) Podwójne etykietowanie za pomocą HA (zielony, strzałka wskazuje klejnoty) i CGRP Abs (czerwony) w przekrojach kręgosłupa. Nie wykryto barwienia HA u myszy, którym wstrzyknięto LacZ (E). (F i G) ekspresja SMN w mięśniach odpowiednio od myszy traktowanych SMN i LacZ. Strzałki w F wskazują na ekspresję SMN za pośrednictwem lentivector. (H) Analiza Western błot brzusznych rdzenia kręgowego u zwierząt LacZ, SMN i WT. Pręty skali: 50 .m (C. E), 100. M (F i G). Myszy zabijano w klinicznym punkcie końcowym, gdy miały trudności z karmieniem, miały wyraźny trend spadkowy i wykazywały problemy z oddychaniem. Analiza przeżycia u myszy SMA, którym wstrzyknięto Lentivector-LacZ lub Lentivector-SMN wykazała, że zastąpienie SMN wydłużyło żywotność średnio o 3 i 5 dni w porównaniu ze zwierzętami, którym podawano lentivector-LacZa, i nieleczonymi (18 . 1,5 dnia w porównaniu z 15). <0,8 dnia i 13 . 1,2 dnia, odpowiednio, P <0,05, Figura 3B). Aby monitorować ekspresję transgenu in vivo, używaliśmy lentiwektora kodującego wersję SMN z epitopem HA. Znakowanie HA w końcowym stadium choroby ujawniło, że białko SMN pochodzące z lentiwektora ulegało ekspresji w około 450. 15 MN w rogu przednim odcinka lędźwiowego rdzenia kręgowego (ryc. 3, C i D). Nie zaobserwowano barwienia HA u myszy, którym wstrzyknięto LacZ (Figura 3E). W celu dalszego wykazania transferu genów za pomocą wektorów Lentivector-SMN, Western blot rdzeniowego rdzenia kręgowego brzucha od myszy leczonych SMN ujawniło wysokie poziomy SMN w porównaniu ze zwierzętami, którym wstrzyknięto LacZ (Figura 3H). Podsumowując, powyższe wyniki wskazują, że przenoszenie genów przy użyciu SMN wykazującej ekspresję lentiwektora na początku choroby indukuje nie tylko wydłużenie okresu życia, ale także powoduje opóźnienie fenotypu motorycznego w ciężkim modelu SMA. Wpływ zastąpienia SMN na przeżycie MN. Aby skorelować ewolucję kliniczną z danymi histologicznymi, oceniano wpływ leczenia SMN na liczbę MN w rdzeniu kręgowym i jądrze twarzowym. Liczba MN twarzy i rdzenia została zatem porównana u myszy SMA leczonych lentivector-LacZ . i Lentivector-SMN . w momencie, gdy osiągnęły śmiertelny kliniczny punkt końcowy (Figura 4). U zdrowych młodych miotów WT, średnio 55 MN dla acetylotransferazy cholinowej (pozytywnych pod względem ChAT) było obecnych na sekcję jądra twarzowego (Figura 4F). Liczebność komórek w końcowym stadium choroby ujawniła, że liczby MN ChAT-dodatnich na odcinek pnia mózgu były znacząco wyższe u myszy traktowanych Lentivector-SMNa niż u myszy kontrolnych lentivector-LacZ, z zauważalnym 120% wzrostem przeżycia MN (38. 2,5 versus 17,2-ChN-dodatni MNs, n = 4, P <0,001, Figura 4, A, B i F). Lędźwiowe MN są zwykle atakowane wcześnie w przebiegu choroby u myszy SMA. Tak więc, zgodnie z oczekiwaniami, na etapie przedwczesnego zakończenia choroby, tylko minimalne. choć nadal statystycznie znaczące. różnice w liczbie komórek LN w odcinku lędźwiowym wykryto pomiędzy zwierzętami traktowanymi lentiwektorem-LacZ i zwierzętami traktowanymi Lentivector-SMN (Fig. 4, C = E). Figura 4 Wymiana genu SMN chroni MNy rdzeniowe i móżdżkowe u myszy SMA. Immunoreaktywność ChAT w myszach traktowanych Lentivector-SMNa (A, insert) i lentivector. Lac-Z. (B, insert) [podobne: co oznacza sen o zdradzie, lks strażak pielgrzymowice, nalewka z aronii liście wiśni ] [podobne: facf, mosir jastrzębie, pozycja na rowerze szosowym ]