Skip to content

Lentivector, w którym pośredniczy SMN w mysim modelu zaniku mięśni kręgosłupa czesc 4

1 miesiąc ago

807 words

Immunohistochemia przedstawiająca CGRP-dodatnie MN w odcinku lędźwiowym rdzenia kręgowego zwierząt, którym wstrzyknięto Lentivector-SMNy (C) i lentivector-LacZ . (D). (E) Liczba komórek przeżywających MN w odcinku lędźwiowym kręgosłupa w WT (kontrola), Lentivector. Lac-Z ., i Lentivector. SMN. Myszy SMA w końcowym stadium choroby. (F) Kwantyfikacja jądra twarzy MN pod kontrolą, zwierząt lentivector-LacZa i Lentivector-SMNa w końcowym stadium choroby. Pręty skali: 100 .m. Terapia genowa SMN wywołuje minimalną odpowiedź immunologiczną. Transfer genu za pośrednictwem Lentivector u 2-dniowych myszy SMA indukował minimalną odpowiedź immunologiczną w mięśniach. Specyficzne markery Ab stosowano do wykrywania komórek reagujących na odpowiedź immunologiczną w miejscu wstrzyknięcia w końcowym stadium choroby. W żadnym przypadku po podaniu wirusa EIAV nie stwierdzono niepożądanych patologii mięśni lub rdzenia kręgowego (ryc. 5). Wstrzyknięcia domięśniowe Lentivector-SMN i wytwarzanie białka SMN (Figura 3B) powodowały nieznaczną reakcję immunologiczną, składającą się jedynie z małej infiltracji makrofagów FA11 + (Figura 5A) i komórek T CD3 + (Figura 5B) wokół przewodu igłowego. Ponadto bardzo mało lub brak komórek P7 / 7-MHC klasy IIp-dodatnich zaobserwowano w wstrzykniętych mięśniach (Figura 5C). Figura 5 Odpowiedź immunologiczna u myszy SMA tydzień po dostarczeniu domięśniowym lentivector-SMN. Abs używane do wykrywania składników odpowiedzi immunologicznej w wstrzykniętym obszarze mięśnia były (A) P7 / 7: MHC klasy II; (B) CD3: komórki T; i (C) FA11: makrofagi. Wszystkie zwierzęta wykazywały niewielką infiltrację w miejscu wstrzyknięć (strzałki). Pręty skali: 100 .m. Dyskusja Nasze dane pokazują, wykorzystując anatomiczne i patologiczne wyniki, że retrostylnie transportowany lentivector wydajnie transdukuje do 70% wszystkich MN w odcinku lędźwiowym rdzenia kręgowego i pniu mózgu w modelu SMA. Przy stosowaniu takiego systemu lentiwektorowego, przenoszenie genów SMN osiąga znaczne przywrócenie ekspresji SMN w linii komórkowej fibroblastów od pacjentów z SMA typu I. Zgłaszamy tutaj, wierzymy po raz pierwszy, że wektory te można z powodzeniem wykorzystać do terapii genowej SMN w modelu myszy SMA. Lentiwektor eksprymujący SMN indukuje przedłużenie przeżycia w klinicznie istotnym modelu SMA typu I. W szczególności, leczenie SMN w pobliżu początku choroby opóźniało wystąpienie choroby i zwiększoną oczekiwaną długość życia myszy SMA. Pomimo wysiłków na całym świecie, SMA jest, jak dotąd, nadal nieuleczalna, częściowo z powodu jego ciężkości i ponieważ metody dostarczania terapeutycznie atrakcyjnych cząsteczek są nadal nieskuteczne. Jak dotąd w tej dziedzinie odnotowano jedynie badanie terapii genowej (19). W poprzednim badaniu (19) przenoszenie genów kardiotrofiny-1, przy użyciu domięśniowej iniekcji wektorów adenowirusowych, indukowało wydłużenie czasu życia innego modelu myszy SMA (20) o 30% (19). Teoretycznie podejście do wymiany SMN jest proste i łatwe do osiągnięcia. To podejście stanowi wyzwanie medyczne, gdy rozważa się, że myszy SMA rozwijają fenotyp 5 dni po urodzeniu, najpierw przez zmniejszenie masy ciała, a następnie utratę MN rozpoczynającą się w wieku 9 dni. W miarę postępu choroby rozwijają się także bliższe osłabienie i atrofia mięśni, co prowadzi do paraliżu końskiego i śmierci w wieku około 13.27 dni. Aby wyjaśnić minimalny wpływ zastąpienia SMN na przeżycie modelu myszy SMA, moglibyśmy zaproponować następujące możliwości: (a) ekspresja SMN może wymagać odtworzenia nie tylko w MN, ale także w innych typach komórek, takich jak glej (21); (b) okno czasowe myszy SMA jest zbyt krótkie, aby wystąpiła pełna ekspresja SMN i o wiele więcej MN (w niniejszym badaniu, podawanie Lentivector-SMN przeprowadzono w P2, jednak wczesne leczenie, na przykład w macicy, mogłoby jeszcze bardziej zwiększyć przeżycie tych myszy); (c) zostało już zgłoszone w modelu zwierzęcym innej choroby MN (ALS), że zwiększone zapotrzebowanie metaboliczne (hipermetabolizm) może być czynnikiem zwiększającym podatność na MN (22). Wydaje się zatem, że inne czynniki mogą przyczynić się do chorób MN. Zazwyczaj dostarczanie rekombinowanych czynników wzrostu, takich jak GDNF i IGF-I, przyniosło marginalną skuteczność terapeutyczną w próbach klinicznych dla chorób MN, takich jak ALS, przypuszczalnie z powodu ich krótkiego okresu półtrwania i słabego dostępu do MN (23). Obecna metodologia dostarczania genów omija takie potrzeby i problemy, a nasze odkrycia sugerują nawet, że ukierunkowane dostarczanie kandydatów terapeutycznych w pobliżu zwyrodniałych ciał komórek MN przez domięśniową iniekcję retrogradely transportowanych wektorów wirusowych może być pomocne i, być może, nawet krytyczne do uzyskania leczenia terapeutycznego. wydajność. Na poparcie tej sugestii, wcześniej wykazaliśmy, stosując tę samą metodologię, że terapia genowa VEGF za pośrednictwem lentiwektora osiąga jeden z najwyższych terapeutycznych skutków dla przeżycia w dotychczasowym modelu myszy ALS (12)
[więcej w: odklejenie siatkówki oka, pogotowie dentystyczne olsztyn, obliczanie wskaźnika bmi ]
[więcej w: leczenie żylaków kończyn dolnych, strażak pielgrzymowice, lks strażak pielgrzymowice ]