Skip to content

Receptor acetylocholiny mutacje podjednostek leżą u podstaw szybko-kanałowego zespołu miastenicznego i wieloogniskowej kongenity artrogrypozy czesc 4

2 tygodnie ago

599 words

W przypadku AChR typu dorosłego i płodowego zawierającego E59K, wiązanie powierzchniowe zredukowano do około 60% poziomów obserwowanych dla odpowiednich receptorów typu dzikiego. Podobnie zmniejszone wiązanie 125I – (3 – BuTx obserwowano w ekstraktach Triton X-100 z komórek HEK293 transfekowanych. i. E59K (Figura 2b). Wydaje się, że odzwierciedla to zmniejszoną ekspresję / złożenie dimerów E59K, a nie jakąkolwiek zmianę powinowactwa do 125I – (3 – BuTx, jak typ dziki. i dimery E59K (lub pełne AChR) wykazywały podobne krzywe wiązania 125I – (3 – BuTx (Figura 2c). Figura 2 (a) Ekspresja zmutowanych podjednostek A59K i .756del2 zawierających AChR dorosłych i płodów w komórkach HEK293. 125I – y – wiązanie BuTx z powierzchniowymi receptorami AChR zawierającymi mutanta. podjednostki wyrażane w komórkach HEK293. AChR na powierzchni komórki (całkowity, lewy) i AChR na powierzchni komórki wytrącony przez przeciwciało swoiste dla podjednostki anty (3 – (anty-p, z prawej) z transfekowanych komórek HEK293. Wyniki są znormalizowane dla wiązania 125I -. – BuTx z . i reprezentują średnią. SD z czterech eksperymentów. (b i c) Ekstrakty Triton X-100 z komórek HEK 293 transfekowanych cDNA zmutowanych p, p, i. (b) wiązanie 125I – y – BuTx z a, A ^, E59K i A 756del2. (c) zależność między dawką a odpowiedzią wiązania 125I -. – BuTx do. i. E59K. Elektrofizjologia. W celu potwierdzenia patogenności AE59K, porównywano prądy jednokanałowe zarejestrowane z komórek HEK293 transfekowanych cDNA AChR typu dzikiego lub zmutowanego. Najpierw zbadaliśmy prawdopodobieństwo otwarcia dorosłych AChR typu dzikiego i zmutowanych przy względnie wysokich stężeniach ACh. W stężeniach od 10 do 500 .m aktywność AChR występowała w skupieniach otworów z poszczególnych kanałów oddzielonych dłuższymi zamkniętymi okresami, a tym samym umożliwiła oszacowanie prawdopodobieństwa otwarcia kanału przy różnych stężeniach ACh. Przykładowe zapisy aktywności klastra AChR typu dzikiego i zmutowanej osoby dorosłej w 30 .M ACh (Figura 3a) pokazują, że prawdopodobieństwo otwarcia AChR w klastrze jest wysokie dla typu dzikiego (0,69. 0,01), ale niskie dla mutanta (0,175. 0,02). Zatem w klastrze zmutowane kanały spędzają znacznie krótszy okres w stanie otwartym. Krzywe dawka-odpowiedź ACh o prawdopodobieństwie otwarcia dają EC50 równe 14,2 i 58,4. M ACh odpowiednio dla dorosłego i dorosłego dorosłego AChR typu dzikiego (Figura 3b). Figura 3Acetylocholina zależność dawka-odpowiedź dorosłego typu dzikiego i dorosłego. E59K-AChR wyrażona w komórkach HEK293. (a) Aktywność klastra dorosłego AChR lub dorosłego. E59K-AChR w obecności 30. M ACh. (b) zależność dawka-odpowiedź pomiędzy prawdopodobieństwem otwarcia kanału w obrębie zdefiniowanej grupy a stężeniem ACh (puste kółka, dorosły dziki typ, wypełnione koła, dorosły. E59K-AChR). Każdy punkt danych reprezentuje wyniki z jednej poprawki. Dane zostały dopasowane do funkcji logistycznej. EC50 wynosiło 14,2, a 58,4. M dla typu dzikiego i dorosłego. E59K-AChR, odpowiednio. Następnie przyjrzeliśmy się czasowi wybuchu AChR u dorosłych i płodów typu dzikiego w porównaniu z AChR u dorosłych i płodów zawierających. E59K (Figura 4 i Tabela 1). Dziki i zmutowany rozkład czasu trwania serii AChR może być dopasowany przez trzy komponenty o długości sekwencji. Trzecia (lub najdłuższa) składowa długości impulsu, t3, jest głównym wyznacznikiem charakterystyk kanału jonowego. AChR zawierający. E59K powodował znaczące zmniejszenie czasu trwania trwania tego najdłuższego składnika zarówno dla receptorów dla dorosłych, jak i dla płodu; dla dorosłych AChR, t3 (ms) 5,06. 0,46. 2,75. 0,05 (P <0,01); dla płodowego AChR, t3 (ms) 10.95. 1.13. 6,48. 0,05 (P <0,03). Zatem zarówno AChR typu dorosłego, jak i płodowego, zawierające mutację E59K, będą prawdopodobnie miały zarówno mniej, jak i krótszą aktywację kanału. Figura 4 Prądy jednokanałowe ludzkiego dorosłego i płodowego AChR i dorosłego. E59K-AChR i płodowego. E59K-AChR wyrażanego w komórkach HEK293. Lewy panel pokazuje przykłady aktywacji jednokanałowej (otwory są odchyleniami w dół, filtrowane przy 4,37 kHz). Paski skali odnoszą się do wszystkich przykładowych śladów. Prawy panel pokazuje histogramy odpowiadające czasowi trwania impulsu połączone z sumą trzech funkcji wykładniczych; najdłuższy komponent długości trwania jest wskazany dla każdego histogramu. Tabela Okres wegetacji Dyskusja Według naszej wiedzy, jest to pierwszy pełny raport dotyczący mutacji w AChR. podjednostkowy gen leżący u podstaw CMS. Ten CMS kojarzy się z congenita artrogrytozy multiplex i dostarczamy dowodów, że. mutacje podjednostkowe wpływają na podtypy AChR u dorosłych i płodów, a zatem są prawdopodobną przyczyną obu zaburzeń [patrz też: lks pielgrzymowice, lks strażak pielgrzymowice, obliczanie wskaźnika bmi ] [więcej w: pogotowie dentystyczne olsztyn, nalewka z aronii liście wiśni, co oznacza sen o zdradzie ]