Skip to content

Rodzinna izolowana niedoczynność przytarczyc spowodowana mutacją w genie dla czynnika transkrypcyjnego GCMB czesc 4

1 miesiąc ago

758 words

Hybrydyzacja znakowanej izotopowo sondy odpowiadającej eksonowi 3 GCMB do genomowego DNA, który został strawiony EcoRI, ujawniła pojedynczą przewidywaną prążek około 10. 11 kb u zdrowych osobników i propositus. rodzice, ale nie w propositus (ryc. 5, lewy panel), potwierdzający homozygotyczną delecję tej części genu (ryc. 2). W celu dalszego udoskonalenia allelu. GCMB, hybrydyzujemy znakowaną radioaktywnie sondę DNA obejmującą eksony 3 do 5 z równoważnymi ilościami strawionego EcoRI DNA od tych osobników. DNA od zdrowych osobników ujawniło dwa hybrydyzujące fragmenty o oczekiwanych rozmiarach (11,5 kb i 4,6 kb obejmujące egzony 1-4 i ekson 5, odpowiednio, Figura 2), które również były obecne, ale z obniżonym (. 50%) natężeniem sygnału w DNA z propositus. rodziców (rysunek 5, prawy panel). Przeciwnie, DNA z probanda hybrydyzowało tylko z pojedynczym fragmentem o nieprawidłowym rozmiarze (. 8,0 kb), który był również obecny przy zmniejszonej intensywności sygnału u jej dwóch rodziców (Figura 5, prawy panel). Wyniki te wskazywały, że proband był homozygotyczny pod względem częściowej delecji genu GCMB, który obejmuje miejsce EcoRI obecne na granicy egzon 4-intron 4. Aby dokładniej zdefiniować delecję, zaprojektowaliśmy serię sensownych starterów oligonukleotydowych, które hybrydyzowały z sekwencjami w 5. region genu GCMB i testowano zdolność każdego do amplifikacji genomowego DNA z probandu przy użyciu startera antysensownego znajdującego się w intronie 4. Te eksperymenty wykazały, że 5. granica delecji znajduje się 1901 bp powyżej kodonu inicjatora, a 3. granica znajduje się na granicy 4 eksonu 4, z utratą miejsca EcoRI. Obliczona wielkość delecji wynosi 7 792 bp, co dobrze zgadza się z wielkością (około 8 kb) przewidzianą na podstawie wyników analizy endonukleaz restrykcyjnych (Figura 5). Ponadto, nasze analizy wykazały, że każdy rodzic był heterozygotyczny pod względem tej samej delecji genu. Podobne analizy molekularne dziesięciu dodatkowych, niepowiązanych pacjentów z izolowaną niedoczynnością przytarczyc nie ujawniły analogicznej mutacji. Figura 5 Analiza pod kątem białego błękitu genu GCMB. Genomowy DNA z probanda (Pt), jej ojca (F) i matki (M) oraz dwóch niespokrewnionych zdrowych osobników (NL) strawiono przy użyciu EcoRI i hybrydyzowano z wyznakowanym radioaktywnie genomowym DNA odpowiadającym eksonowi 3 (po lewej) lub eksonom 3 5 (z prawej). Wskazano pozycje znaczników masy cząsteczkowej. Genomowy DNA z probandu (Pt) nie hybrydyzował z sondą eksonu 3 i unikalny fragment EcoRI 8,4 kb hybrydyzował z sondą 3. 5. Rodzice probantów wykazali hybrydyzację sondy eksonu 3 (3 z dwoma fragmentami restrykcyjnymi o oczekiwanej wielkości iz nienormalnym fragmentem 8,4 kb, wszystkie z obniżoną intensywnością sygnału (patrz tekst). Przeprowadziliśmy analizę molekularną genu GCMB u wszystkich dostępnych krewnych propositus przez analizę restrykcyjną EcoRI genomowego DNA (Figura 1). Oprócz jej dwóch rodziców, propositus. dziadek ze strony ojca był również heterozygotyczny pod względem allelu. GCMB. Natomiast jej niedotknięty brat był homozygotyczny pod względem allelu GCMB typu dzikiego. Trzy z nieobarczonych rodzeństwa jej ojca również były heterozygotyczne pod względem mutacji. Niestety, żaden z dwóch pozostałych badanych pacjentów, III-1 i III-9, nie zgodził się na udział w tych badaniach. Biorąc pod uwagę rzadkość rodzinnej izolowanej niedoczynności przytarczyc, przeprowadzono rozszerzoną analizę haplotypu przy użyciu ściśle ze sobą połączonych markerów mikrosatelitarnych u rodziców i probanda (Tabela 2 i Figura 6), z analizami genotypów przeprowadzonymi dla markera D6S470 u dziadków ojca w celu ustalenia Przydzielanie faz jednoznacznie. Ta analiza wykazała wspólne genotypy, które otaczały gen GCMB w zakresie 5 cM. Opierając się na tym ograniczonym zestawie danych, uważamy, że jest wysoce nieprawdopodobne, aby ta mutacja powstała niezależnie dwa razy na tym samym podłożu genetycznym. W związku z tym najbardziej prawdopodobnym wyjaśnieniem naszych wyników jest wpływ założyciela, którego homozygotyczność polega na zejściu z segmentu chromosomalnego zawierającego delecję GCMB (30) (rysunek 6). Ten model jest zgodny z obserwacją rzadkiego allelu występującego w stanie homozygotycznym i sugeruje, że oba allele GCMB s-GCMB prawdopodobnie pochodzą od pojedynczego wspólnego przodka. Figura 6 Analiza pod kątem haplotypu locus GCMB. Powyższy rysunek pokazuje haplotypy dla locus GCMB uzyskane za pomocą polimorfizmów mikrosatelitarnych. Proband jest oznaczony przez pełny okrąg, a jej heterozygotyczny ojciec i matka są oskarżeni o odpowiednio wypełniony do połowy kwadrat i okrąg. Ta figura pokazuje, że oba macierzyste zmutowane allele (. GCMB) mają identyczne haplotypy dla serii markerów, które obejmują ponad 5 cM genomowego DNA na chromosomie 6p23y24. Tabela 2 Heterozygotyczność i częstotliwość allelowa Dyskusja Zidentyfikowaliśmy mutację genu GCMB jako nowego mechanizmu izolowanej niedoczynności przytarczyc
[patrz też: herbata z miodem i cytryną, strażak pielgrzymowice, lks strażak pielgrzymowice ]
[hasła pokrewne: nalewka z aronii liście wiśni, co oznacza sen o zdradzie, pełnia księżyca a samopoczucie ]