Skip to content

Tetramery MHC klasy II identyfikują specyficzne dla peptydu ludzkie limfocyty T CD4 + proliferujące w odpowiedzi na antygen grypy A ad 5

1 miesiąc ago

577 words

Wyniki te wskazują, że metoda wykrywania tetrameru jest zarówno swoista, jak i wrażliwa dla populacji komórek T reaktywnych wobec HA307A 319. Zastosowanie barwienia tetramerycznego, wraz z cytometrią przepływową, do identyfikacji komórek specyficznych dla antygenu umożliwia równoczesną analizę komórek przy użyciu dodatkowych fluorochromów. Ta dodatkowa analiza fenotypowa może dostarczyć ważnych informacji o odpowiedzi swoistej dla antygenu, takiej jak typ zaangażowanej komórki T, obecność aktywacji lub innych markerów i wytwarzanie cytokin przez barwienie wewnątrzkomórkowe. W tym badaniu zbadaliśmy poziomy ekspresji powierzchniowej CD3, CD4, CD8 i CD25 w celu dalszego scharakteryzowania komórek zidentyfikowanych przez tetramer HA307A 319. Dane na Figurze 3 są bramkowane w celu pokazania tylko komórek zidentyfikowanych jako pozytywny tetramer HA 317- 319. Figura 3, aib pokazują, że prawie wszystkie komórki tetramer-dodatnie w obu stymulowanych peptydem HA307A 319 pk i całych szczepionkach szczepionki przeciw grypie są CD4 + CD8 .. Podobnie, fig. 3, c i d pokazują, że większość komórek pozytywnych względem tetrameru to CD3 + CD25 + dla obu próbek. Wnioskujemy, że tetramer DRB1 * 0401-HA307A 319 jest związany prawie wyłącznie z limfocytami T ograniczonymi, aktywowanymi i proliferującymi klasy II, zgodnie z oczekiwaniami, nadając dalsze wsparcie swoistości metody wykrywania tetrameru. Figura 3 Fenotypowa charakterystyka komórek specyficznych względem tetrameru HA307A 319. Komórki T oczyszczone wełną nylonową znakowano CFSE przed hodowlą z autologicznymi adherentnymi komórkami i antygenem. W dniu 7 komórki zabarwiono tetramerem znakowanym PE, a następnie wybarwiono kombinacjami przeciwciał anty-CD3, -CD4, -CD8 i -CD25 znakowanych fluorochromem przed analizą cytometrii przepływowej. Wszystkie panele są bramkowane na komórkach pozytywnych względem tetrameru. Górne panele pokazują barwienie CD8 w porównaniu do barwienia CD4 w komórkach stymulowanych (a) peptydem HA307A 319 i (b) całą szczepionką przeciw grypie, podczas gdy niższe panele pokazują CD25 w porównaniu do barwienia CD3 w komórkach stymulowanych peptydem (c) HA307A 319, i (d). ) cała szczepionka przeciw grypie. Granice dla populacji pozytywnych i negatywnych zostały określone przez kontrole. Procenty przedstawione na marginesach każdego panelu przedstawiają procent wszystkich komórek obecnych w każdym kwadrancie. Panele przedstawiają wyniki z reprezentatywnego indywidualnego eksperymentu. Jednoczesne stosowanie tetramerów peptydowych-MHC klasy II i barwienie CFSE dostarcza potężnego narzędzia do oceny i selekcji odpowiedzi komórek T specyficznych względem antygenu. Bezpośrednia identyfikacja proliferacji swoistej dla peptydów w hodowlach pierwotnych pozwala uniknąć analizy ograniczających rozcieńczeń w celu obliczenia częstotliwości prekursorów i umożliwia jednoczesną analizę fenotypową komórek specyficznych dla antygenu przy użyciu cytometrii przepływowej. Niniejsze badanie demonstruje immunodominację epitopu HA307A 319 w kontekście kompleksowej odpowiedzi na całą szczepionkę przeciwko grypie i ilustruje, w jaki sposób tetramery można stosować do bezpośredniego identyfikowania immunodominujących specyficzności antygenowych. Potencjał ładowania różnych peptydów do tetramerów sugeruje wiele zastosowań, chociaż stabilność specyficznych tetramerów peptydowych klasy II prawdopodobnie będzie się różnić między peptydami. Zastosowanie tetramerów klasy II umożliwia zrozumienie na dużo bardziej szczegółowym poziomie odpowiedzi immunologicznej na czynniki zakaźne i choroby autoimmunologiczne. Podziękowania Autorzy chcieliby podziękować S. Masewiczowi za fachową pomoc techniczną,. Lernmark za konstruktywne komentarze i porady oraz K. Nelson i M. Gallagher za pomocną dyskusję i pomoc przy czterokolorowej analizie cytometrii przepływowej. Praca ta była częściowo wspierana przez grant AI-44443 z National Institutes of Health. EJ Novak jest wspierany przez Poncin i Acheivement Awards dla stypendystów College Doctors.
[więcej w: odklejenie siatkówki oka, herbata z miodem i cytryną, co oznacza sen o zdradzie ]
[podobne: co oznacza sen o zdradzie, pełnia księżyca a samopoczucie, odklejenie siatkówki ]