Skip to content

Tetramery MHC klasy II identyfikują specyficzne dla peptydu ludzkie limfocyty T CD4 + proliferujące w odpowiedzi na antygen grypy A czesc 4

1 miesiąc ago

729 words

Komórki T oczyszczone wełną nylonową z krwi obwodowej wybarwiono CFSE, barwnikiem fluorescencyjnym, który stabilnie wiąże aktynę szkieletu szkieletowego (22). Komórki zabarwione CFSE hodowano z autologicznymi adherentnymi komórkami pulsowanymi peptydem HA307A 319, całą szczepionką przeciw grypie lub TT. Po 7 dniach hodowli do oznaczenia komórek przed analizą za pomocą cytometrii przepływowej zastosowano tetramery HA307A 319. Za każdym razem, gdy komórka się dzieli, CFSE jest równomiernie rozłożony pomiędzy komórki potomne, co skutkuje zmniejszeniem o połowę fluorescencji CFSE. Dlatego też liczbę podziałów komórkowych można określić przez porównanie uzyskanej fluorescencji CFSE z oryginalną fluorescencją populacji macierzystej. Jak pokazano na Figurze 2, wszystkie 3 antygeny indukują proliferację komórek, jak wskazują populacje komórek o obniżonej fluorescencji CFSE, przedstawione na osi poziomej. Oś pionowa pokazuje fluorescencję z tetramerów HA307A 319 znakowanych PE, a 2 kolumny reprezentują równoważne eksperymenty przeprowadzane na komórkach od 2 dawców. Jak pokazano w lewym górnym kwadrancie z fig. 2, aib, znakowany tetramer wyraźnie zidentyfikował znaczącą liczbę komórek specyficznych wobec HA307A 319 zarówno w próbkach szczepionki HA307A 319, jak i całych szczepionkach przeciwko grypie obu dawców. Zgodnie z naszą wiedzą, po raz pierwszy komórki pomocnicze T specyficzne dla epitopu zostały bezpośrednio zaobserwowane w stymulacji ludzkich limfocytów pobranych z krwi obwodowej. Figura 2A307A 319 Identyfikacja tetrameru komórek specyficznych względem antygenu w odniesieniu do fluorescencji CFSE. Komórki T oczyszczone wełną nylonową, znakowane CFSE przed hodowlą z autologicznymi adherentnymi komórkami i antygenem, barwiono w dniu 7 za pomocą tetrameru HA307-3 319 znakowanego PE i analizowano następnie za pomocą cytometrii przepływowej. Każdy rząd przedstawia komórki z innego stymulującego antygenu dla 2 różnych osobników: (a) 10 .g / ml peptydu HA307A 319, (b) cała szczepionka przeciw grypie zawierająca 11 .g / ml HA, (c) cały TT z maksymalną stymulacją. dawka. We wszystkich panelach komórki są bramkowane na rozpraszanie do przodu i boku, oś pionowa pokazuje fluorescencję PE tetrameru HA307A 319, a oś pozioma przedstawia fluorescencję CFSE w skali logarytmicznej 4-dekady. Ponadto oś pozioma pokazuje odpowiednią liczbę podziałów komórkowych, przy czym. P. przedstawiające niepodzielną populację rodziców. Ta skala została obliczona na podstawie różnych pików fluorescencji CFSE wytworzonych przez poliklonalną stymulację za pomocą PHA i IL-2, jak opisano w Methods. Procenty przedstawione na marginesach każdego panelu przedstawiają procent wszystkich komórek obecnych w każdym kwadrancie. Panele przedstawiają wyniki z reprezentatywnych indywidualnych eksperymentów. Badanie komórek stymulowanych peptydem HA307A 319 wykazało, że u obu osobników około 90% komórek wiążących tetramer stanowiło populację podzieloną, co odzwierciedla specyficzną ekspansję tej kohorty komórek T. Obserwowana liczba podziałów komórkowych dla danej fluorescencji CFSE jest pokazana wzdłuż osi poziomej dla wszystkich części figur. W dawcy populacja wiążąca tetramer dzieliła średnio 6,5-krotnie podczas 7-dniowej hodowli, jak obliczono przez fluorescencję CFSE, podczas gdy w donorze 2 komórki wiążące tetramer dzieliły średnio 9-krotnie. Ta różnica w liczbie podziałów odpowiada większej liczbie podzielonych komórek widzianych u dawcy 2. Obliczona częstotliwość prekursorów komórek specyficznych dla tetrameru DRB1 * 0401 jest podobna dla 2 osobników, w zakresie od 3 do 5 na 100 000 komórek, w zależności od indywidualny eksperyment. Populacja wiążąca tetramer dzielących się komórek obejmowała odrębną część całkowitych komórek dzielących się w stymulowanej przez HA307A 319 próbce. W dawcy 1, niektóre z podzielonych komórek, które są ujemne względem tetrameru, prawdopodobnie reprezentują komórki T specyficzne dla HA307a 319 w kontekście DRB1 * 0101, ponieważ haplotyp dawcy jest DRB1 * 0401, DRB1 * 0101 i DR1 został opisany jako zdolny do leczenia prezentowanie peptydu (23). Ponadto poziomy proliferacji w poziomie od 1% do 7% wszystkich komórek obserwowano nawet w próbkach kontrolnych, w których nie dodano antygenu, w zależności od osobnika (dane nie pokazane). IL-2 i inne cytokiny uwalniane przez specyficzne względem antygenu komórki HA307a 319 prawdopodobnie zwiększyłyby to tło poprzez zwiększoną aktywację i proliferację osobnika. W komórkach stymulowanych całą szczepionką przeciw grypie (Figura 2b), była również określona populacja komórek pozytywnych dla tetrameru dla obu osobników, pokazana w lewym górnym kwadrancie. Zatem, nawet w kontekście energicznej i złożonej proliferacyjnej odpowiedzi komórek T na antygeny wirusowe, specyficzne komórki T odpowiadające immunodominującemu epitopowi są łatwo identyfikowane. Nie było znakowania tetrameru komórek stymulowanych TT pomimo intensywnej proliferacji (ryc. 2c)
[przypisy: lks beskid brenna, pełnia księżyca a samopoczucie, wisła strumień ]
[przypisy: pierogi z mąki orkiszowej, pogotowie dentystyczne olsztyn, nalewka z aronii liście wiśni ]