Skip to content

Tradycyjny lek ziołowy zwiększa klirens bilirubiny poprzez aktywację receptora jądrowego CAR ad

3 miesiące ago

705 words

Myszy utrzymywano w obiekcie zwierzęcym wolnym od patogenów w standardowym cyklu 12 godzinnego światła / 12 godzin ciemności. Myszy karmiono standardową karmą dla gryzoni i wodą ad libitum. Humanizowaną transgeniczną linię mysią CAR wytworzono przez przecięcie transgenem albumina-promotor / ludzka CAR na tło zerowe CAR, jak opisano poprzednio (25). Różne grupy myszy odpowiednio dopasowane pod względem genetycznym (n = 3. 4) wstrzyknięto dootrzewnowo rozpuszczalnikowi (olej kukurydziany) lub 1,4-bis [2- (3,5-dichloropirydoksy)] benzenowi (TCPOBOP) (3 mg / kg), 5-pregnen-3a-ol-20-on-16a-karbonitryl (PCN) (40 mg / kg) i 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioksyny (TCDD) (100 yg / kg) przez 3 dni. Kwas [4-chloro-6- (2,3-ksylideno) -pirymidynylotiooctowy (WY-14,643) (0,1%) dodano do żywności i myszy karmiono przez tydzień. W przypadku leczenia Yin Zhi Huang lub Yin Chin, odpowiednio dobrane grupy myszy raz dziennie podawano przez 3 dni podskórną Yin Zhi Huang lub Yin Chin (10 ml / kg / dzień). W przypadku traktowania 6,7-dimetylosculetyną (Indofine Chemical Company, Hillsborough, New Jersey, USA) związek najpierw rozpuszczono w małej objętości DMSO, a następnie zmieszano dobrze z olejem kukurydzianym. Grupy myszy zerowych WT i CAR były wstrzykiwane dootrzewnowo dwa razy dziennie przez 3 dni kontrolnym nośnikiem lub 6,7-dimetylosculetyną (100 mg / kg). Czwartego dnia zwierzętom podawano dożylnie roztwór bilirubiny (10 mg / kg) przez żyłę ogonową. Po godzinie pobrano krew i oznaczono całkowitą bilirubinę w surowicy, jak opisano (24). Wątroby usunięto i całkowitą bilirubinę z wątroby mierzono przez diazowanie z użyciem p-jodoaniliny, jak opisano (26). Bilirubinę (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) najpierw rozpuszczono w 0,1 N NaOH, następnie doprowadzono do pH 8,5. 9,5 za pomocą N HCl, a na koniec rozcieńczono izotonicznym roztworem soli do stężenia 3 mg / ml. Roztwór był zawsze świeżo przygotowany w warunkach słabego oświetlenia. Hybrydyzacja Północna. Całkowity RNA wątroby został przygotowany przy użyciu odczynnika Trizol (Invitrogen, Rockville, Maryland, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Równoważne ilości RNA od trzech do czterech myszy połączono w pulę i 15 ug każdej próbki użyto do analizy Northern blot. Sondę cDNA cytochromu P450 1A1 (CYP1A1) wygenerowano za pomocą RT-PCR z mysiej wątroby RNA. Zastosowane startery to 5a -AGATACCTGGGCCTCAGAGAACT-3. i 5. -CAGTCCATAATACAAAGCTC-3 .. Wszystkie inne mysie sondy cDNA zostały wygenerowane jak opisano wcześniej (23, 24). We wszystkich przypadkach pojedyncza blot była seryjnie hybrydyzowana z różnymi sondami, przy czym p-aktyna służyła jako kontrola dla równoważnego obciążenia. Pierwotna hodowla hepatocytów. Pierwotne hepatocyty myszy przygotowano i utrzymywano w podłożu William s E (Invitrogen), uzupełnionym 10 .g / ml insuliny (Sigma-Aldrich) i 10 7 M acetonidu triamcynolonu, jak opisano (27). Komórki traktowano różnymi stężeniami 4 (3-hydroksyacetofenonu (Sigma-Aldrich) i 6,7-dimetylosculetyną (ICC) rozpuszczonymi w DMSO przez 24 godziny. Całkowity RNA wyizolowano za pomocą minizestawu Qiagen RNeasy (Qiagen, Valencia, Kalifornia, USA) zgodnie z instrukcjami producenta, a 15 .g RNA zastosowano do analizy Northern blot. Do analizy białka komórki inkubowano z rozpuszczalnikiem lub 50. M 6,7-dimetylosculetiną przez 3 godziny. Pięćdziesiąt mikrogramów ekstraktu jądrowego lub 50 .g całkowitego białka komórkowego frakcjonowano za pomocą PAGE i poddano analizie immunoblotowej; hCAR wykrywano następnie przeciwciałem monoklonalnym wobec znacznika epitopowego c-Myc (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, Indiana, USA). Wyniki CAR w sposób skoordynowany reguluje szlak klirensu bilirubiny. Poza funkcją ksenobiotyku, CAR reaguje na podwyższony poziom bilirubiny, zwiększając klirens wątrobowy tego toksycznego endobiozy (24). Wykazano również, że kilka innych zależnych od liganda regulatorów transkrypcji reguluje odpowiedzi wątroby zarówno na ksenobiotyki, jak i na endobiotyki, w tym na receptory X pregnane (PXR), PPARy i arylowy receptor węglowodorowy (AhR). Kilka linii dowodów sugeruje potencjalne role tych białek w klirensie bilirubiny. Zatem PPAR. Udowodniono, że klofibrat ligandu indukuje ekspresję UGT1A1 (28) i obniża poziom bilirubiny we krwi u ludzi (29, 30). Zgłaszano, że PXR aktywuje ekspresję składników szlaku klirensu bilirubiny, w tym UGT1A1 (31) i MRP2 (32). AhR, który może być aktywowany przez bilirubinę (33, 34), ostatnio doniesiono, że aktywuje ekspresję UGT1A1 (35). Hydroksylacja bilirubiny przez CYP1A1, inny dobrze znany cel AhR, może również przyczynić się do detoksyfikacji bilirubiny (36). Aby porównać role tych czterech receptorów w metabolizmie bilirubiny, grupy myszy wstępnie traktowano specyficznymi aktywatorami każdego białka przez 3 dni, a ich zdolność do usuwania bilirubiny z krążenia badano przy użyciu testu ostrej klirensu (24).
[więcej w: lks pielgrzymowice, pogotowie dentystyczne olsztyn, arbuz indeks glikemiczny ]
[więcej w: pierogi z mąki orkiszowej, pogotowie dentystyczne olsztyn, nalewka z aronii liście wiśni ]