Skip to content

Tradycyjny lek ziołowy zwiększa klirens bilirubiny poprzez aktywację receptora jądrowego CAR czesc 4

3 miesiące ago

380 words

U myszy WT wszystkie geny wykazywały co najmniej część odpowiedzi, ze szczególnie silną indukcją CYP2B10 i UGT1A1 (Figura 2b). Z wyjątkiem UGT1A1, który wykazywał niewielką odpowiedź resztkową, te indukcje były nieobecne u zwierząt z zerowym poziomem CAR. Słaba indukcja UGT1A1 u zwierząt z nokautem CAR może wskazywać na pewien wpływ Yin Zhi Huang na PXR lub inne receptory. Wpływ Yin Zhi Huang na klirens bilirubiny zmniejsza się wraz z malejącymi dawkami (Figura 2c). Dodatkowe wsparcie dla roli CAR w tej odpowiedzi zapewnia obserwacja, że obserwuje się podobną zależność od dawki dla zwiększonego wskaźnika klirensu bilirubiny i indukcji mRNA dla CYP2B10. Leczenie Yin Zhi Huang nie miało wpływu na ekspresję CAR. Ponieważ mysie i ludzkie CAR mogą wykazywać zupełnie różne odpowiedzi na różne aktywatory, ważne było sprawdzenie, czy ludzki CAR może również pośredniczyć w działaniu Yin Zhi Huang na klirens bilirubiny. W tych badaniach wykorzystano opisane wcześniej humanizowane myszy eksprymujące ludzki zamiast mysiego CAR w wątrobie (24, 25). Te humanizowane myszy nie reagują na TCPOBOP, który jest specyficzny dla mysiego CAR, ale odpowiadają na ogólny fenobarbital aktywatora CAR i specyficzny agonista ludzki CAR 6- (4-chlorofenylo) imidazo [2,1-b] [1 3) O- (3,4-dichlorobenzylo) oksym tiazolo-5-karbaldehydu (39). Trzy grupy humanizowanych myszy otrzymały albo kontrolę zasolenia, Yin Zhi Huang, albo samą Yin Chin, która jest uważana za główne aktywne zioło w mieszaninie Yin Zhi Huang. Chociaż odpowiedź była nieco mniejsza niż u myszy WT, jak wcześniej obserwowano w przypadku aktywacji fenobarbitalem ludzkiego CAR (24), zarówno Yin Zhi Huang, jak i Yin Chin znacząco zwiększały klirens bilirubiny podawanej egzogennie (Figura 3a). Zgodnie z oczekiwaniami z wyników z myszami WT, ekspresja wielu genów docelowych CAR została również zwiększona przez Yin Zhi Huang i Yin Chin u humanizowanych myszy (Figura 3b). Ryc. 3 Human CAR może pośredniczyć w reakcji na Yin Zhi Huang. (a) Humanizowane myszy CAR w wieku od 8 do 10 tygodni podzielono na trzy grupy i otrzymały wywar z PBS (CO), Yin Chin (Y) lub Yin Zhi Huang (YZH) przez zgłębnik przez 3 dni (10 ml / kg /dzień). Czwartego dnia przeprowadzono oznaczenie ostrej klirensu bilirubiny i pomiaru bilirubiny całkowitej w sposób opisany. * P <0,05 względem kontroli. (b) Całkowity RNA wątroby z tych samych zwierząt przygotowano i zastosowano do hybrydyzacji Northern z różnymi sondami, jak wskazano. 6,7-dimetylosculetin aktywuje zarówno mysie jak i ludzkie CAR. Wyniki te wskazują, że Yin Chin zawiera czynnik lub środki, które mogą aktywować zarówno myszy jak i ludzki CAR. Wśród wielu związków obecnych w Yin Chin znajdują się 6,7-dimetylosculetin kumaryny (scoparone) i 4 (3-hydroksyacetofenon (Figura 4a). 6,7-Dimetylosculetin jest głównym składnikiem, zawierającym do 2% Yin Chin w suchej masie i jest związane z wieloma potencjalnymi działaniami biologicznymi (40). Figura 46.7-Dimetylesculetin aktywuje CAR w pierwotnych hepatocytach. (a) Struktury 6,7-dimetylosculetyny i 4 (3-hydroksyacetofenonu. (b) Pierwotne hepatocyty ze zwierząt WT (+ / +) lub knockout CAR (a / p) hodowano w podłożu William E (Invitrogen) i inkubowano z rozpuszczalnikiem (CO) lub wzrastającymi stężeniami 4 (3-hydroksyacetofenonu (HA ; 10 (M lub 50. M) lub 6,7-dimetylokapsułek. M) przez 24 godziny. Przygotowano całkowite RNA komórkowe i 15 .g każdej próbki RNA użyto do hybrydyzacji Northern, jak wskazano. (c) Pierwotne hepatocyty izolowano z humanizowanych transgenicznych myszy CAR i hodowano w obecności rozpuszczalnika lub 10. M lub 50. M 6,7-dimetylosculetyny przez 24 godziny. Piętnaście mikrogramów całkowitego RNA z komórek analizowano przez hybrydyzację Northern. (d) Pierwotne hepatocyty izolowano albo z suplementacji CAR albo z transgenicznych myszy humanizowanych CAR i hodowano w obecności albo rozpuszczalnika, albo 50. M 6,7-dimetylosculetyny przez 3 godziny. Pięć mikrogramów białka ekstraktu jądrowego (górny panel) lub 50 .g całkowitego białka komórkowego (dolny panel) z każdego traktowania frakcjonowano za pomocą SDS-PAGE i poddano immunoblottingowi z przeciwciałem anty-Cyc, które rozpoznaje znacznik epitopu na końcu N ludzki CAR wyrażony w tych zwierzętach. W testach wpływu związków w pierwotnych hepatocytach myszy WT, leczenie 6,7-dimetylosculetiną znacząco indukowało ekspresję CYP2B10, ale hepatocyty z nokautem CAR nie wykazywały odpowiedzi (Figura 4b). W obu przypadkach 4-hydroksyacetofenon nie wywierał żadnego działania. W pierwotnych hepatocytach od humanizowanych myszy CAR, 6,7-dimetylosculetin również indukował ekspresję docelowych genów CAR, szczególnie CYP2B10, UGT1A1 i MRP2; mniejsze odpowiedzi SLC21A6 i GSTA1 i GSTA2 zostały potwierdzone przez densytometrię (Figura 4c). Wiele przejściowych transfekcji z receptorami o pełnej długości lub dwu-hybrydowymi testami dla ssaków do rekrutacji koaktywatora nie dało dowodów, że albo te związki, albo kilka innych testowanych kandydatów działa jako bezpośrednie ligandy agonistyczne CAR (dane nie pokazane). [przypisy: przedszkole strumień, leczenie żylaków kończyn dolnych, arbuz indeks glikemiczny ] [przypisy: facf, mosir jastrzębie, pozycja na rowerze szosowym ]