Skip to content

Typowy polimorfizm SCN5A moduluje biofizyczne działanie mutacji SCN5A czesc 4

1 miesiąc ago

289 words

Biorąc pod uwagę, że okazało się, że H558R hamuje wpływ T512I na zależność bramkowania inaktywującego od napięcia, postawiliśmy hipotezę, że H558R może również ograniczać zakres, w którym powolna inaktywacja rozwija się z T512I. Aby to przetestować, oceniliśmy rozwój powolnej inaktywacji H558R / T512I (rysunek 3a). Stwierdziliśmy, że H558R / T512I znacznie zwiększa powolną inaktywację w stosunku do typu dzikiego, ale w mniejszym stopniu niż sam T512I (patrz tabela 2), popierając naszą hipotezę. Rysunek 3D Opracowanie powolnej inaktywacji. (a) Wolną inaktywację oceniano stosując protokół dwóch impulsów pokazany w wypustce w b. Wykres przedstawia stosunek P2 / P1 dla typu dzikiego, T512I i H558R / T512I w funkcji czasu trwania impulsu P1. Punkty danych dopasowano za pomocą funkcji dwuwykładniczej. Podczas gdy T512I znacznie poprawił powolną inaktywację, H558R osłabiał powolną inaktywację spowodowaną samym T512I. (b) Powolna inaktywacja dzikiego typu i H558R. Wstawka pokazuje protokół używany do oceny. Powolna inaktywacja H558R nie różniła się od typu dzikiego. Tabela 2Dozwój powolnej inaktywacji Szczegółową kinetykę odzyskiwania z inaktywacji oceniano stosując protokół z parami impulsów, w którym odstęp hiperpolaryzujący przed drugim impulsem depolaryzacji (P2) był zmienny (Figura 4a, wkładka). Zarówno dane typu dzikiego, jak i zmutowane następowały dwufazowy przebieg czasowy, odzwierciedlający elementy odzyskiwania, które można przypisać szybkiej i powolnej inaktywacji. Kinetyka odzyskiwania H558R była nieodróżnialna od typu dzikiego (dane nie pokazane, ale patrz tabela 3). Jednakże odzysk T512I był znacznie wolniejszy niż typ dziki (fig. 4a i tabela 3). Ponownie podwójna mutacja H558R / T512I znacząco przyspieszyła odzysk po inaktywacji w porównaniu z samym T512I (P <0,05, Figura 4a i Tabela 3). Wyniki te wskazują również na modulującą rolę polimorfizmu H558R w powolnych cechach mutacji w bramce inaktywacji. Rysunek 4 Odtworzenie od inaktywacji. (a) Odzyskiwanie oceniano stosując protokół dwupulsowy pokazany w wypustce. Punkty danych dopasowano za pomocą funkcji dwuwykładniczej z szybką stałą czasową odpowiadającą odzyskiwaniu z szybkiej inaktywacji i stałej czasu wolnego odpowiadającej odzyskiwaniu z powolnej inaktywacji. Wykreślone są wyniki uzyskane z typu dzikiego, T512I i H558R / T512I. (b) Rozwój powolnej inaktywacji dzikiego typu i 1795insD przy użyciu protokołu pokazanego na figurze 3b. Zaobserwowano, że H558R nie ma wpływu na osłabienie powolnej inaktywacji spowodowanej przez 1795insD. Tabela 3Wykonanie od inaktywacji Aby zbadać, czy modulacja H558R wolnej inaktywacji jest zlokalizowana w mutacjach towarzyszących w łączniku DI-DII, skonstruowaliśmy C-końcową mutację 1795insD i H558R w tym samym cDNA i poddaliśmy je ekspresji w komórkach HEK 293. Mutacja 1795insD zwiększa powolną inaktywację i wywołuje zespół Brugadów, jak opisano wcześniej (5) (Figura 4b). H558R nie miał wpływu na kinetyczne cechy 1795insD (Figura 4b), co sugeruje, że modulacyjna rola H558R nie może być uogólniona na odległe loci kanału i może być specyficzna dla pobliskich mutacji w łączniku DI-DII. Dyskusja Mutacje ludzkiego serca na kanale Na + (SCN5A) leżą u podstaw wielu chorób serca, w tym długiego zespołu QT i zespołu Brugadów. Podczas gdy większość mutacji, które powodują długi zespół QT, powoduje wzmocnienie funkcji kanału Na +, mutacje powodujące zespół Brugadów niezmiennie prowadzą do utraty funkcji kanału Na +. Ostatnie badania zidentyfikowali kolejną klasę mutacji w kanale Na +, które powodują izolowaną chorobę przewodzenia. Tan i in. (3) dostarczył pierwszy dowód na to, że mutacja w SCN5A powoduje konkurencyjne zmiany w bramkowaniu aktywacyjnym i dezaktywacyjnym, gdzie efektem netto jest niewielkie zmniejszenie prądu Na +. wystarczające, aby spowolnić przewodzenie, ale nie zespół Brugadów. Chociaż sugeruje to, że manifestacja określonego fenotypu rytmu (zespół Brugadów lub defekt przewodnictwa) może zależeć od wzajemnych oddziaływań między konkurencyjnymi bramkowymi zmianami, jest również prawdopodobne, że inne, nierozpoznane czynniki przyczyniają się do manifestacji określonego fenotypu choroby. Ostatnie badania zidentyfikowali nowe locus genów dla zespołu Brugadów (10) na chromosomie 3p22-25, różniące się od znanych loci kanału Na + i zachodzące na siebie z wcześniej zgłoszonym stanem wynikającym z locus 3p22-25. rozszerzona kardiomiopatia z chorobą przewodzenia (22). Chociaż nie zidentyfikowano funkcjonalnej roli tego locus genu, badanie sugeruje, że inne, dotąd niezidentyfikowane geny mogą odgrywać rolę w przejawianiu zaburzeń w pobudliwości serca. Zidentyfikowaliśmy nową mutację, T512I, w genie kanału Na + u 2-letniego chłopca, u którego zdiagnozowano blok przewodzenia AV drugiego stopnia [hasła pokrewne: leczenie żylaków kończyn dolnych, pierogi z mąki orkiszowej, zajęcia sportowe dla dzieci ] [patrz też: pozycja na rowerze szosowym, leczenie żylaków kończyn dolnych, strażak pielgrzymowice ]