Skip to content

Zewnątrzkomórkowy wapń wywołuje odpowiedź chemokinetyczną z monocytów in vitro i in vivo ad 5

2 miesiące ago

721 words

Średnia intensywność fluorescencji ekspresji CaR wynosiła 361. 25 jednostek (średnia . SEM) dla nietraktowanych monocytów i wzrosła do 673. 59 po stymulacji MCP-1. Monocytowa ekspresja CaR wzrosła do 519. 48 z SDF-1. leczenie. Migracja monocytów in vivo w kierunku wapnia. Aby określić, czy Ca2 + był aktywny jako chemoatraktant dla monocytów in vivo, sam Ca2 + (5,0 mM), sam MCP-1 lub oba Ca2 + i MCP-1 wstrzyknięto podskórnie myszom C57BL / 6, a tkankę wycięto 18 godzin później. . Akumulację komórek jednojądrzastych barwiących się pozytywnie dla monocytarnego markera Mac-1 odnotowano u myszy, którym wstrzyknięto albo Ca2 +, MCP-1 (Figura 3), albo 10 .M NPS R-467. Nie wykryto podskórnych nacieków komórek u myszy, którym wstrzyknięto sam PBS. Największy stopień przenikania monocytów do tkanek podskórnych zaobserwowano przy 5 mM Ca2 + plus MCP-1, wspierając in vivo synergiczną zależność obserwowaną in vitro (Figura 3). W żadnym z zastosowanych stanów nie obserwowano znaczącego nacieku neutrofilów w miejscu wstrzyknięcia podskórnego, co stwierdzono na podstawie barwienia skrawków hematoksyliną i eozyną. Figura 3Ca2 + jest chemoatraktantem dla monocytów in vivo. Zamrożone skrawki uzyskano po podskórnym wstrzyknięciu myszom samych PBS (aib), 5,0 mM samym CaCl2 (cid) lub 5,0 mM CaCl2 plus 10 ng / ml MCP-1 (e i f). Skrawki wybarwiono hematoksyliną i eozyną (a, c, e) lub skoniugowanym z fosfatazą alkaliczną. Makrofagowym przeciwciałem Mac-1 (b, d, f). Okazjonalne komórki skóry od myszy, którym wstrzyknięto podskórnie samą PBS, zabarwiono dodatnio na Mac-1. Jednakże sam CaCl2 i połączenie CaCl2 i MCP-1 spowodowały gęsty naciek jednojądrzastych komórek, które wybarwiały się pozytywnie w kierunku Mac-1 (wskazane strzałkami w c, d i f). Dane są reprezentatywne dla jednego z dwóch niezależnych eksperymentów. Dyskusja Jonowy wapń jest wysoce regulowany in vivo, ale może być podwyższony w specyficznych mikrośrodowiskach tkankowych, takich jak szpik kostny, i jest szczególnie zmieniony w kontekście trwającej śmierci komórki i stanu zapalnego. Przypuszczając, że to zjawisko może służyć jako prymitywny regulator komórek odpornościowych, zbadaliśmy szereg typów komórek krwiotwórczych pod kątem ekspresji CaR. Podczas gdy receptor ten ulega ekspresji na prymitywnych komórkach hematopoetycznych (I. Olszak, manuskrypt w przygotowaniu), jest uderzająco obfity w dojrzałe komórki monocytowe, a zatem jest kandydatem mediatorem funkcji immunologicznej tego członka wrodzonego układu odpornościowego. Lokalizacja monocytów / makrofagów w miejscach urazu lub stanu zapalnego jest kluczowa dla rozpoczęcia ich roli w obronie gospodarza i wykazano, że jest regulowana przez pewną liczbę członków rodziny chemokin. CaR jest siedmiorzędowym transbłonowym i sprzężonym z białkiem G receptorem, który, jak wykazano, ma wiele wpływów na fizjologię komórki (13). Pojedynczy wcześniejszy raport wykazał, że linia komórkowa ST-2 mysiego szpiku kostnego jest zdolna do chemotaksji w kontekście stymulacji CaR (18). To, czy ta molekuła wpływa na ruchliwość pierwotnych komórek lub komórek układu odpornościowego, nie zostało wcześniej rozwiązane. Udokumentowaliśmy reakcję monocytów na sygnalizację przez CaR w szlaku sprzężonym z Gis połączonym z kinazą tyrozynową, ale nie z kinazą PI-3. Aktywacja tego receptora przez polikationowe pokrewne ligandy (np. Wysoki Ca2 + lub spermina) lub NPS R-4E7, allosteryczny aktywator CaR, spowodowała transmigrację komórek monocytowych, dostarczając mechanizmu do wyjaśnienia wcześniejszej obserwacji innych, że wapń może zwiększać migrację monocytów do utlenionego LDL (30). Brak chemotaksji CaR. /. monocyty w kierunku Ca2 +, nawet jeśli odpowiadają na kontrolną chemokinę, wykazują specyficzność tego zjawiska dla CaR. Przypuszczając, że sygnał Ca2 + prawdopodobnie wchodzi w interakcje z innymi mediatorami odpowiedzi komórkowej, ocenialiśmy, czy odpowiedź migracyjna na MCP-1 była podobnie modulowana przez aktywację CaR. Wpływ sygnalizacji CaR przejawiał się w regulacji w górę receptora MCP-1, w którym pośredniczył mechanizm zmienionego wewnątrzkomórkowego przemytu, a nie nowa synteza białka. Wzajemny wzrost ekspresji CaR odnotowano przy stymulacji CCR2 za pomocą MCP-1, dokumentując wyraźne wzajemne powiązania tych dwóch niepowiązanych członków rodziny 7-TMR. Ta interakcja była widoczna in vivo, jak również in vitro, gdy ligandy były stosowane w izolacji lub w kombinacji z zwierzętami i generowały znaczące nacieki monocytowe w miejscu iniekcji. Tak więc wapń jonowy służy bezpośrednio i pośrednio wpływać na reakcję migracyjną monocytów
[patrz też: lks strażak pielgrzymowice, pogotowie dentystyczne olsztyn, naturalne barwniki do jajek ]
[patrz też: odklejenie siatkówki oka, obliczanie wskaźnika bmi, pierogi z mąki orkiszowej ]